ئۇسترىتسە موگۇسى لاككاز NRC 620 نىڭ ئىشلەپچىقىرىلىشى ۋە بىئوخىمىيىلىك خاراكتېرىنى ئېنىقلاش ۋە ئالما شەربىتىنى تازىلاشتىكى ئۈنۈمىنى باھالاش.

28 سېلسىيە گرادۇستا 25 كۈن مۇقىم تۇرغۇزۇلغاندىن كېيىن، *Pleurotus ostreatus* NRC620 دىن ئېلىنغان لاككاز زەمبۇرۇغ ئۆستۈرۈش مۇھىتىدا ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىقنى كۆرسەتتى. بۇ ئېنزىمنىڭ ئەڭ ياخشى pH قىممىتى ۋە تېمپېراتۇرا قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 3.0 ۋە 70 سېلسىيە گرادۇس بولدى. 40 سېلسىيە گرادۇس ۋە 50 سېلسىيە گرادۇستا 2 سائەت تۇرغۇزۇلغاندىن كېيىن، ئېنزىمنىڭ ئاكتىپلىقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %68.33 ۋە %59.61 نى ساقلىدى. سىترات-فوسفات بۇفېرىدا (pH 7.0) 2 سائەت تۇرغۇزۇلغاندىن كېيىن، ئېنزىمنىڭ ئاكتىپلىقى %100 نى ساقلىدى. 10 mM MgSO₄ ۋە CuSO₄ قوشۇش ئېنزىمنىڭ ئاكتىپلىقىنى ئايرىم-ئايرىم ھالدا تەخمىنەن %21 ۋە %35 ئاشۇردى، NaCl، MnCl₂، KCl ۋە CaCl₂ ئېنزىمنىڭ ئاكتىپلىقىنى چەكلىدى. ABTS نى ئاساس قىلىپ ئىشلەتكەندە، *Pleurotus ostreatus* NRC 620 لاككازنىڭ كىنېتىكىلىق پارامېتىرلىرى (Km ۋە Vmax) ئايرىم-ئايرىم ھالدا 1.99 mM ۋە 16,217 μmol min−1 L−1 بولدى. ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىلىرىنى ئېنزىملىق بىر تەرەپ قىلىش pH قىممىتى ۋە قويۇقلۇقىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىتىپ، بۇ تۆۋەنلەش ساقلاش ۋاقتىنىڭ ئۇزىرىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولدى. لاككاز بىر تەرەپ قىلىش ئالما شەربىتىدىكى ئومۇمىي فېنول مىقدارىنى ئازراق تۆۋەنلىتىۋەتتى، ئەمما ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنىڭ تۆۋەنلىشى كۆزىتىلمىدى.
يېقىنقى يىللاردىن بۇيان، تەتقىقاتچىلار يېمەك-ئىچمەك سانائىتىدە يېشىل بىئوتېخنىكا تېخنىكىسىنى قوللىنىشقا دىققەت قىلدى. لاككازا يېمەك-ئىچمەك سانائىتىدىكى ئەڭ پايدىلىق ئېنزىملارنىڭ بىرى بولۇپ، مېۋە سۈيى پىششىقلاش، پىشۇرۇش، ھاراقنى مۇقىملاشتۇرۇش ۋە يېمەك-ئىچمەك مەھسۇلاتلىرىنىڭ ئورگانولېپتىك خۇسۇسىيىتىنى ياخشىلاش قاتارلىق ساھەلەردە قوللىنىلىدۇ.¹نۇرغۇن ئالىي دەرىجىلىك ئۆسۈملۈكلەر ۋە مىكرو ئورگانىزملار لاككازا ئاجرىتىپ چىقىرىدۇ،²دېيتېرومىتسېت، ئاسكومىتسېت ۋە باسىدىئومىتسېت قاتارلىق زەمبۇرۇغلارمۇ لاككازا ئىشلەپچىقىرالايدۇ.³لاككاز (EC 1.10.3.2) ئۈچ خىل مىس ئاتومىدىن تەركىب تاپقان سىستېما ئارقىلىق مولېكۇلا ئوكسىگېننى سۇغا ئايلاندۇرۇپ، ھەر خىل فېنول بىرىكمىلىرى ۋە خۇشپۇراق ئامىنلارنى ئوكسىدلايدۇ. مېۋە-چېۋە شەربىتى ئىشلەپچىقىرىش جەريانىدا، ئېنزىملىق ۋە ئېنزىمسىز قوڭۇر رەڭگە ئۆزگىرىش مۇھىم مەسىلە.⁴بۇ ماددىلار مېۋە شەربىتىنىڭ رەڭگى، تەمى ۋە خۇشپۇراقلىقىغا سەلبىي تەسىر كۆرسىتىدىغان بولغاچقا، ئۇلارنى چىقىرىۋېتىش كېرەك.⁵
بارلىق مېۋىلەر ئىچىدە، ئالما دۇنيا مىقياسىدا ۋە ياۋروپا ئىتتىپاقىدا ئەڭ كۆپ ئىستېمال قىلىنىدۇ. 2019-يىلى، ئالما ئىشلەپچىقىرىش مىقدارى 87 مىليون توننىدىن ئېشىپ، دۇنيا مىقياسىدا ئۈچىنچى ئورۇندا تۇردى.⁶ئالما تەركىبىدە نۇرغۇن فېنول بىرىكمىلىرى بار، بۇنىڭ ئىچىدە فلاۋونوئىد ۋە قەھۋە كىسلاتاسى ۋە خىلورگېن كىسلاتاسى قاتارلىق فېنول كىسلاتالىرى بار.⁷ئالما شەربىتى ئادەتتە سۈزۈك ھالەتتە ئىستېمال قىلىنىدىغان بولغاچقا، سۈزۈش جەريانىدا فېنول تەركىبلىرىنىڭ تەخمىنەن %50 تىن %90 كىچە قىسمى يوقىلىدۇ.⁸بۈگۈنكى كۈندە، ئىستېمالچىلار ئادەتتە پولىفېنول مىقدارى يۇقىرى بولغان بۇلۇتلۇق ئالما شەربىتى قاتارلىق ئەڭ ئاز پىششىقلاپ ئىشلەنگەن مەھسۇلاتلارنى تاللايدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، ئۇنىڭدىكى فېنول مىقدارى يۇقىرى بولغاچقا، بۇ خىل ئالما شەربىتى رەڭگىنىڭ ئۆزگىرىشى ۋە قاراڭغۇلىشىشىغا ئالاھىدە ئاسان ئۇچرايدۇ.⁹ئالما شەربىتىنىڭ قاراڭغۇلىشىشىنى ئازايتىش ياكى ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن، 60-90 سېلسىيە گرادۇستا پاستېرلاشتۇرۇش قاتارلىق ئىسسىقلىق بىر تەرەپ قىلىش ئۇسۇللىرى قاتارلىق ھەر خىل تېخنىكىلار قوللىنىلىدۇ.¹⁰قانداقلا بولمىسۇن ، ساكېدا گالۋېزنىڭ تەتقىقاتىغا قارىغاندا¹¹، ئىسسىقلىق بىلەن بىر تەرەپ قىلىش ئۇچۇچان خىمىيىلىك ماددىلارنى ۋەيران قىلىپ، ئالما شەربىتىنىڭ ئورگانولېپتىك خۇسۇسىيىتىگە تەسىر كۆرسىتىدۇ. ئىسسىقلىق بىلەن بىر تەرەپ قىلىش ئۇسۇللىرىنىڭ ئورنىغا يۇقىرى كرىتىك كاربون تۆت ئوكسىد، ئۇلترا بىنەپشە نۇرلىنىش، ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى، يۇقىرى گىدروستاتىك بېسىم ياكى يۇقىرى بېسىملىق گوموگېنلاشتۇرۇش قاتارلىقلار بار.¹²بۇ تېخنىكىلارنىڭ ئۈنۈمى ۋە ماس كېلىدىغان مېۋە شەربەتلىرىنىڭ مىقدارى ئىشلىتىلگەن پارامېتىرلار ۋە مەھسۇلاتنىڭ خۇسۇسىيىتىگە باغلىق. ئۇلارنىڭ كەڭ كۆلەمدە ئىشلىتىلىشى يۇقىرى تەننەرخ، بەزى يېمەكلىك مەھسۇلاتلىرىنىڭ سۈپىتىگە بولغان سەلبىي تەسىر ياكى ئېنزىملارنىڭ يېتەرلىك دەرىجىدە ئاكتىپسىزلىنىشى قاتارلىق سەۋەبلەر تۈپەيلىدىن چەكلىنىدۇ.^13،14
لاككاز مېۋە شەربىتىنى مۇقىملاشتۇرۇش ۋە سۈزۈكلەشتۈرۈش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.¹⁵گۆكمەن قاتارلىقلار.¹⁶مېۋە سۈيىنى تازىلاش ئۈچۈن لاككاز ئىشلىتىشنى تەۋسىيە قىلىمىز، چۈنكى ئۇ فېنول بىرىكمىلىرىنى ئۈنۈملۈك چىقىرىۋېتىش ئارقىلىق ئۇلارنى ھەر قانداق ئۇلترا سۈزۈش پەردىسى ئارقىلىق ئاسانلا چىقىرىۋېتىلىدىغان پولىمېر ياكى ئولىگومېرغا ئايلاندۇرۇپ، ئالما سۈيىنىڭ 50 سېلسىيە گرادۇستا ئالتە ھەپتىگىچە مۇقىم رەڭ ۋە سۈزۈكلۈكنى ساقلىشىغا ياردەم بېرىدۇ. تازىلانغان *Trichoderma* لاككاز ئاليۇمىن ئوكسىد مارجانلىرىغا ئورنىتىلىپ، ئالما سۈيىنىڭ مىكروبلار بىلەن بۇلغىنىشى سەۋەبىدىن كېلىپ چىققان تەمسىز بىرىكمىلەرنى تاللاپ چىقىرىۋېتىشكە ئىشلىتىلدى.¹⁷
ئالما شەربىتىنىڭ ئۇچۇچان تەركىبلىرىنىڭ تەخمىنەن %80-90 ى ئېفىرلار ۋە ئالدېھىدلاردىن تەركىب تاپقان بولۇپ، ئۇلار شەربەتكە ئۆزگىچە خۇشپۇراق بېرىدۇ.¹⁸*Trametes versicolor* دىكى لاككاز ئالما شەربىتىنى سۈزۈكلەشتۈرۈش ئۈچۈن ياش كوكۇس قېپىدىن ئېلىنغان تەبىئىي تالادىن ياسالغان ئەرزان باھالىق تىرەككە ئورنىتىلدى.¹⁹ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا ئالما شەربىتىنىڭ مۇقىملىشىشى (رەڭگى ۋە لايلىقى) ئېنزىمسىز ياكى ھەرىكەتسىزلەندۈرۈش ئۇسۇللىرى ئارقىلىق، ياكى ئۇلترا سۈزۈش بىلەن بىرلەشتۈرۈلۈپ تەكشۈرۈلگەن.^5،19قانداقلا بولمىسۇن، ساقلاش جەريانىدا ئالما شەربىتىنىڭ فىزىكىلىق-خىمىيىلىك خۇسۇسىيىتىگە زەمبۇرۇغ لاككازىنىڭ تەسىرى ئېنىق ئەمەس. شۇڭا، بۇ تەتقىقاتنىڭ مەقسىتى زەمبۇرۇغ لاككازى بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغاندىن ۋە ئىككى ھەپتىلىك توڭلاتقۇدا ساقلانغاندىن كېيىن ئالما شەربىتىنىڭ فىزىكىلىق-خىمىيىلىك خۇسۇسىيىتى، فېنول بىرىكمىسىنىڭ مىقدارى ۋە ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىدىكى ئۆزگىرىشلەرنى تەجرىبە ئارقىلىق تەكشۈرۈشتىن ئىبارەت. لاككازىلار فېنول بىرىكمىلىرىنى ئوكسىدلىنىش ئىقتىدارىغا ئىگە بولۇپ، بۇ ئۇلارنى ھەر خىل سانائەت جەريانلىرىدا، جۈملىدىن شەربەتنى تازىلاشتا ئىشلىتىشكە ئۈمىدۋار قىلىدۇ. بۇ تەتقىقات *Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككازىلارنى تەكشۈرۈپ، ئۇلارنىڭ پائالىيىتى ۋە شەربەتنى تازىلاشتىكى ئۈنۈمىنىڭ ئەڭ ياخشى شارائىتىغا دىققەت قىلدى. ئۇسترىتسە موگۇسى (P. ostreatus NRC 620) توغرىسىدىكى تەتقىقاتلار يەنىلا چەكلىك بولسىمۇ، ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردا Trametes versicolor ۋە Ganoderma lucidum قاتارلىق ھەر خىل زەمبۇرۇغ مەنبەلىرىدىن ئېلىنغان ئېنزىملار تەكشۈرۈلگەن. بۇ تەتقىقاتنىڭ مەقسىتى بۇ ئېنزىمنىڭ يېمەكلىك سانائىتىدە قوللىنىلىش ئېھتىماللىقىنى باھالاش ۋە ئۇنىڭ ئۆزگىچە خۇسۇسىيەتلىرىنى، بولۇپمۇ ئۇنىڭ ئەڭ ياخشى pH قىممىتى ۋە تېمپېراتۇرىسىنى گەۋدىلەندۈرۈشتىن ئىبارەت.
2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) Sigma-Aldrich (كانادا) دىن سېتىۋېلىندى. باشقا بارلىق رېئاگېنتلار ئانالىز دەرىجىسىدە ئىدى.
دۆلەتلىك تەتقىقات مەركىزىنىڭ مىكرو ئورگانىزم مەدەنىيىتى توپلاش مەركىزى داڭلىق ئۇسترىتسە موگۇسى تۈرى NRC620 نى قولغا كەلتۈردى. قوشۇمچە يېتىشتۈرۈلگەندىن كېيىن، بۇ تۈر 4 سېلسىيە گرادۇستا كارتوشكا دېكستروزا ئاگار قىيپاشلىقىدا ساقلاندى. ئوكۇل تەييارلاش ئۇسۇلى تۆۋەندىكىچە: 10 كۈنلۈك، تولۇق يېتىلگەن مىتسېلىي كارتوشكا دېكستروزا ئاگار تەخسىسىگە ئوكۇل قىلىنىپ، 28 سېلسىيە گرادۇستا ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. 10 كۈندىن كېيىن، مىكروبسىز مېتال مۇشت ئارقىلىق ئاگار مۇھىتىدىن ئۈچ دانە 12 مىللىمېتىرلىق مىتسېلىي توسۇقى ئېلىۋېتىلدى ۋە 250 مىللىلىتىرلىق ئېرلېنمېيېر بوتۇلكىسىغا سېلىندى، پاختا تىقىلغان بولۇپ، ئىچىدە 50 مىللىلىتىر مىكروبسىزلاندۇرۇلغان مەدەنىيەت مۇھىتى بار ئىدى (pH 5.0، بۇرۇن ئوسمان قاتارلىقلار تەسۋىرلىگەندەك).²⁰). مەدەنىيەتلەر 28 سېلسىيە گرادۇستا 18 كۈن ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. ئاندىن مەدەنىيەتلەر 1-نومۇرلۇق Whatman فىلتىر قەغىزى ئارقىلىق سۈزۈلدى، نەتىجىدە ھاسىل بولغان ئۈستۈنكى سۇيۇقلۇق ئېنزىم مەنبەسى بولۇپ خىزمەت قىلدى.
لاككازا پائالىيىتى ABTS نى ئاساس قىلىپ ئىشلىتىپ بېكىتىلدى. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى (2 مىللىلىتىر) 500 μL 0.3 mM ABTS (0.1 M ناترىي سىترات بۇفېرىدا ئېرىتىلگەن، pH قىممىتى 4.5) ۋە دىستىللانغان سۇ بىلەن سۇيۇلدۇرۇلغان ئېنزىم ئەۋرىشكىسىنىڭ لازىملىق مىقدارىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.^21،22لاككازنىڭ ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا (28 سېلسىيە گرادۇس ± 2) ABTS نى ئوكسىدلىيالايدىغانلىقىنى كۆزدە تۇتۇپ، ABTS نىڭ ئوكسىدلىنىشى 420 نانومېتىر (ε) دىكى سۈمۈرگۈچلۈكنىڭ ئېشىشىنى ئۆلچەش ئارقىلىق بېكىتىلدى.₄₂₀= 36,000 سانتىمېتىر^-1 M ^-1) Agilent Carry-100 UV سپېكتروفوتومېتىرى ئىشلىتىلگەن. مىنۇتىغا 1 μmol ABTS ئوكسىدلىنىش ئۈچۈن بىر بىرلىك لاككازا پائالىيىتى تەلەپ قىلىنغان. ئاقسىل قويۇقلۇقى ئىچكى كونترول قىلىش ئۇسۇلى سۈپىتىدە كالا قان زەردابى ئالبۇمىننى ئىشلىتىپ، برادفورد ئۇسۇلى ئارقىلىق بېكىتىلگەن.^23،24
ئېنزىمنى ئۇسترىتسە موگۇسى تۈرىدىكى NRC 620 دىن ئالغاندىن كېيىن، ئۇنىڭ پائالىيىتى 28 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرىدا 25 كۈن ئىچىدە ئوخشىمىغان ئۆستۈرۈش ئارىلىقىدا ئۆلچەندى.
تېمپېراتۇرىنىڭ لاككازا پائالىيىتىگە بولغان تەسىرىنى تەتقىق قىلىش ئۈچۈن، 20 سېلسىيە گرادۇستىن 90 سېلسىيە گرادۇسقىچە بولغان تېمپېراتۇرا دائىرىسىدە تەجرىبە ئېلىپ بېرىلدى. ئېنزىمنى قوشۇش ۋە رېئاكسىيەنى باشلاشتىن بۇرۇن، بۇففېر (0.1 M ناترىي سىترات، pH قىممىتى 4.5) ۋە سۇبسترات (ABTS) ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ھەر خىل تېمپېراتۇرىدا 5 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى. ئېنزىمنىڭ ئىسسىقلىق مۇقىملىقى 0.05 M ناترىي فوسفات سۇبستراتىدا (pH قىممىتى 7.0) ئايرىم-ئايرىم ھالدا 40، 50، 60 ۋە 70 سېلسىيە گرادۇستا 2 سائەت تۇرغۇزۇش ئارقىلىق باھالاندى. ئاندىن قالغان پائالىيەت ABTS سۇبسترات ئارقىلىق باھالاندى.
pH قىممىتىنىڭ لاككازا پائالىيىتىگە بولغان تەسىرى pH قىممىتى 2.5 دىن 7.0 گىچە بولغان 0.1 M سىترات-فوسفات بۇففېرلىرىدا ABTS سۇبسترات سۈپىتىدە ئىشلىتىلىپ باھالاندى. pH قىممىتىنىڭ مۇقىملىقىنى باھالاش ئۈچۈن، ئېنزىم ئېرىتمىسى 40 سېلسىيە گرادۇستا ئىككى سائەت 0.1 M سىترات ۋە Tris بۇففېرلىرىدا (pH قىممىتى 3، 4، 6 ۋە 7) ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. ABTS سۇبسترات سۈپىتىدە ئىشلىتىلگەن قالدۇق پائالىيەت ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن ھېسابلىنىدۇ.
لاككاز ئايرىم-ئايرىم ھالدا 2.5 mM ۋە 10 mM قويۇقلۇقتا ھەر خىل مېتال ئىئونلىرى (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+ ۋە Mn2+) بار ناترىي فوسفات بۇففېرىدا (0.05 M، pH قىممىتى 7.0) 10 مىنۇت ئىنۇباتسىيە قىلىندى. ئاندىن رېئاكسىيەنى باشلاش ئۈچۈن سۇبسترات (ABTS) قوشۇلدى ۋە نىسپىي ئاكتىپلىق باھالاندى.
كىنېتىكىلىق پارامېتىرلارنى (Vmax ۋە Km) بېكىتىش ئۈچۈن، ھەر خىل قويۇقلۇقتىكى (0.025–3 mM) لاككاز بىلەن ABTS ئوكسىدلىنىشى pH قىممىتى 4.5 دە ئۆلچەندى.^{تۇراقلىقلار}مىكايلىس-مېنتېن تەڭلىمىسىنىڭ قىممىتى Lineweaver-Burk گىرافىكى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ، بۇ گىرافىكتا رېئاكسىيە سۈرئىتىنىڭ ئاساسىي ماددىلارنىڭ قويۇقلۇقىنىڭ فۇنكسىيەسى سۈپىتىدە ئەكس قىممىتى كۆرسىتىلىدۇ. كىنېتىكىلىق تۇراقلىق قىممەتلەر GraphPad Prism 6.01 نەشرىدىكى يۇمشاق دېتال ئارقىلىق Lineweaver-Burk گىرافىكىدىن ھېسابلىنىدۇ.
ئالما سۈيى بىلەن پاكىز يۇيۇلغاندىن كېيىن، ئۇلار ئىككىگە بۆلۈنۈپ، تولۇق ئاپتوماتىك Braun MP80 ئالما سۈيى سىقىش ماشىنىسى (گېرمانىيەدە ئىشلەنگەن) ئارقىلىق سۈيى سىقىلدى. سۈيى تۆت قەۋەت پىشلاق رەختىدىن سۈزۈلدى. كونترول گۇرۇپپىسىغا ھېچقانداق ئېنزىم قوشۇلمىدى، يېڭى تەييارلانغان ئالما سۈيىگە %2.0 لىك لاككازا (سىناق قىلىنغان ئەڭ ئۈنۈملۈك قويۇقلۇق) قوشۇلدى، ئاندىن ئۇ 4 سېلسىيە گرادۇستا ئىككى ھەپتە ساقلاندى.
تىتراتقىلى بولىدىغان كىسلاتالىق (TA) ۋە pH قىممىتى بولتون قاتارلىقلارنىڭ ئۇسۇلى بويىچە بېكىتىلدى.^ئال.27ھەر بىر ئەۋرىشكىنىڭ pH قىممىتى رەقەملىك pH ئۆلچەش ئەسۋابى (JENWAY 3510 pH مېتېر) ئارقىلىق ئۆلچەندى. تىترلىغىلى بولىدىغان كىسلاتالىق قىممىتى (TA) تۆۋەندىكى فورمۇلا ئارقىلىق ئالما كىسلاتاسىغا ئاساسەن ھېسابلىنىدۇ.
بۇ يەردە V ۋە C ئايرىم-ئايرىم ھالدا تىترلاشتا ئىشلىتىلگەن ناترىي گىدروكسىد ئېرىتمىسىنىڭ ھەجىمى (mL) ۋە قويۇقلۇقى (0.1 مول/L). K ئالما كىسلاتاسىنىڭ ئايلىنىش كوئېففىتسېنتى بولۇپ، 0.067 گە تەڭ، W بولسا ئالما شەربىتىنىڭ ماسسىسى (g).
ئېرىيدىغان قاتتىق ماددىلارنىڭ ئومۇمىي مىقدارى (^TDS) بارلىق مېۋە شەربىتى ئەۋرىشكىلىرىنىڭ تەركىبى PAL-1 يانچۇق رېفراكتومېترى (ATAGO، توكيو، ياپونىيە) ئارقىلىق بېكىتىلدى. ھەر بىر ئۆلچەشتىن كېيىن، ئوپتىكىلىق لىنزا دېئونلاشتۇرۇلغان سۇ بىلەن چايقالدى، ھەمدە ھەر بىر ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىسى ئۈچ قېتىم سىناق قىلىندى. ھەر بىر ئەۋرىشكىنىڭ قىممىتى ئۈچ ئۆلچەشنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ. ھەر بىر ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىسىنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ± ئۆلچەملىك چەتنىشىش بۇ نەتىجىلەرنىڭ ئوتتۇرىچە قىممىتى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ.
ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىلىرىنىڭ يېپىشقاقلىق دەرىجىسى ئايلانما ۋىسكوزىمېتىر (RV, Rheotest 2, گېرمانىيە) ئارقىلىق باھالاندى. ئەۋرىشكە ۋىسكوزىمېتىرنىڭ «S2» سىلىندىرىنىڭ ئىچىگە قويۇلدى. كۆرۈنگەن يېپىشقاقلىق قىرقىش كۈچى بىلەن قىرقىش سۈرئىتى ئەگرى سىزىقىنىڭ يانتۇلۇقى ئارقىلىق ئىپادىلەندى، بۇ ئەگرى سىزىق قىرقىش كۈچى ۋە ھەر خىل قىرقىش سۈرئىتىدىكى (1.00 دىن 437.4 s⁻¹ گىچە) ماس كېلىدىغان ئەگرى سىزىقلاردىن ھېسابلىنىدۇ. كۆرۈنگەن يېپىشقاقلىقنى ھېسابلاش فورمۇلاسى تۆۋەندىكىدەك:
بۇ يەردە η كۆرۈنگەن قېۋىقلىق (cP)، τ قىرقىش كۈچى (dyn/cm²)، γ قىرقىش سۈرئىتى (sec⁻¹)، (τ) بولسا تۆۋەندىكى فورمۇلا ئارقىلىق بۇراش مومېنتى (α) ۋە سىلىندىر (Z) قىممەتلىرى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ: τ = Z α.
قوڭۇرلىنىش كۆرسەتكۈچى مېيداۋ ۋە باشقا ئۇسۇللار بويىچە بېكىتىلدى^ئال.2910 مىللىلىتىرلىق مېۋە شەربىتى ئەۋرىشكىسى 2750 xg دا 10 مىنۇت مەركەزدىن قاچۇرۇلدى. 5 مىللىلىتىر مېۋە ئۈستى سۇيۇقلۇقى 5 مىللىلىتىر %95 ئېتانول بىلەن ئارىلاشتۇرۇلدى. ئارىلاشمىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى Shimadzu UV سپېكتروفوتومېتىرى (UV-1601 PC) ئارقىلىق 420 نانومېتىردا ئۆلچەندى.
بولتون قاتارلىقلار تەسۋىرلىگەندەك، ئومۇمىي فېنول مىقدارى (TPC) Folin-Ciocalteu رېئاگېنتى ئارقىلىق رەڭ ئۆلچىمى ئارقىلىق بېكىتىلدى.^[27]0 دىن 500 مىللىگرام/لىتىرغىچە بولغان قويۇقلۇق ئۈچۈن گال كىسلاتاسىنىڭ ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىقى قۇرۇلدى (^r²= 0.997). نەتىجىلەر گال كىسلاتاسىنىڭ ئېكۋىۋالېنتى (mg GAE/mL) شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ.
25 μL ئالما شەربىتىگە 125 μL دىستىللانغان سۇ ۋە 2850 μL FRAP ئېرىتمىسى قوشۇپ، ئارىلاشمىنى قاراڭغۇ يەردە قويۇپ قويۇڭ.³⁰مىنۇت. ئاندىن Shimadzu UV سپېكتروفوتومېتىرى (UV-1601 PC) ئارقىلىق 593 nm دىكى يۇتۇلۇشنى ئۆلچەڭ. FRAP رېئاگېنتى 300 mM ئاتسېتات بۇفېر (pH 3.6)، 20 mM تۆمۈر (III) خىلورىد ۋە 10 mM 2,4,6-ترىس(2-پىرىدىل)ترىئازىن (TPTZ) (40 mM HCl دا ئېرىتىلگەن) نى 10:1:1 نىسبەتتە ئارىلاشتۇرۇش ئارقىلىق تەييارلاندى. Trolox نى ئۆلچەم قىلىپ ئىشلىتىپ ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق ھاسىل قىلىندى (^R²= 0.999)، نەتىجىلىرى μM Trolox/mL شەكلىدە ئىپادىلىنىدۇ.
DPPH ئۇسۇلى ئارقىلىق بىر تەرەپ قىلىنغان ۋە بىر تەرەپ قىلىنمىغان مېۋە شەربەتلىرىنىڭ ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقى بېكىتىلىپ، ئۇلارنىڭ DPPH ئەركىن رادىكاللىرىنى تازىلاش ئىقتىدارىنى باھالىدى.³¹ئون مىكرولىتىر مېتانولدىكى 1 مىللىلىتىر DPPH ئېرىتمىسى (100 μM) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلدى. قاراڭغۇدا 30 مىنۇت رېئاكسىيە قىلغاندىن كېيىن، ئارىلاشمىنىڭ سۈمۈرۈلۈشى Shimadzu UV سپېكتروفوتومېتىرى (UV-1601 PC) ئارقىلىق 517 نانومېتىردا ئۆلچەندى. نەتىجىلەر كالىبراتسىيە ئەگرى سىزىقىغا ئاساسەن ترولوكىس ئېكۋىۋالېنتى (μM ترولوكىس/ml) سۈپىتىدە ئىپادىلەندى (_^R2= 0.990).
قولغا كەلتۈرۈلگەن سانلىق مەلۇماتلار شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، NRC 620 ئۇسترىتسە موگۇسىدا ئېچىتىشنىڭ 18-كۈنىنىڭ ئاخىرىدا ئەڭ يۇقىرى لاككازا ئىشلەپچىقىرىش مىقدارى كۆزىتىلىپ، 1302 U/L ئاكتىپلىققا يەتكەن. بۇ لاككازا ئىشلەپچىقىرىشنىڭ ئەڭ ياخشى ئۆستۈرۈش ۋاقتىنى بېكىتىشنىڭ ئاساسى بولغان (1-رەسىم). ئېنزىم ئىشلەپچىقىرىش مىقدارى ئۆستۈرۈش ۋاقتىنىڭ ئۇزارىشىغا ئەگىشىپ ئاشقان بولسىمۇ، ئېشىش سۈرئىتى ئۆستۈرۈش ۋاقتى بىلەن بىۋاسىتە مۇناسىۋەتلىك ئەمەس؛ 21 كۈندىن كېيىن، ئېنزىم پائالىيىتى پەقەت 90 U/L ئاشقان (1390 U/L غا يەتكەن). شۇڭا، مەھسۇلات مىقدارىنى ئۆستۈرۈش ۋاقتىنىڭ ئۇزارىشىنىڭ ئىقتىسادىي پايدىسى بىلەن تەڭپۇڭلاشتۇرۇش ئۈچۈن، ئاخىرىدا 18 كۈن ئەڭ ياخشى ئۆستۈرۈش ۋاقتى قىلىپ تاللانغان.
Pleurotus ostreatus NRC 620 دىكى ئۆستۈرۈش ۋاقتىنىڭ لاككاز مەھسۇلاتىغا تەسىرى. ئۈچ (12 مىللىمېتىر) زەمبۇرۇغ مىتسېلىياسى 50 مىللىلىتىر ستېرىللىق سۇيۇقلۇققا ئوكۇل قىلىنىپ، ئاندىن 28 سېلسىيە گرادۇستا ئوخشىمىغان ۋاقىتلاردا ئۆستۈرۈلدى.
باشقا تەتقىقاتلارغا ماس ھالدا، بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز زەمبۇرۇغلارنىڭ ئەڭ يۇقىرى دەرىجىدىكى لاككازا ئاجرىلىپ چىقىرىشىغا ئېرىشىش ئۈچۈن ئەڭ ياخشى ئۆستۈرۈش مەزگىلىنىڭ 7 كۈندىن 36 كۈنگىچە بولىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.³²ئېزىكې قاتارلىقلارنىڭ قارىشىچە.³³، *Trametes polyzona* WRF03 ئېچىتىشنىڭ توققۇزىنچى كۈنىنىڭ ئاخىرىغىچە ئەڭ يۇقىرى مىقداردا لاككازا ئىشلەپ چىقاردى، ئۇنىڭ ئالاھىدە ئاكتىپلىقى 1637 U/mg ئاقسىل بولدى. ئۇنىڭدىن باشقا، ئوسمان قاتارلىقلار.³⁴*Trichoderma harzianum* S7113 نىڭ بەشىنچى كۈنى ئۆستۈرۈش جەريانىدا كۆپ مىقداردا لاككازا ئاجرىلىپ چىقىرىدىغانلىقىنى بايقىدى. لاككازا ئىشلەپچىقىرىش سۈرئىتى ئون تۆتىنچى كۈنى ئەڭ يۇقىرى پەللىگە يەتتى ۋە ئاندىن ئاستا-ئاستا تۆۋەنلىدى.³⁴ئېنزىمنىڭ ئاجرىلىپ چىقىشى ئاساسلىق ئۆسۈش باسقۇچىدىمۇ يۈز بېرىشى مۇمكىن بولسىمۇ، ئادەتتە ئوتتۇرا باسقۇچتا ئەڭ يۇقىرى پەللىگە چىقىدۇ ۋە كاربون ياكى ئازوت مەنبەسىنىڭ ئىستېمال قىلىنىشى بىلەن قوزغىلىدۇ.^34،35
Pleurotus ostreatus NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككاز 50 سېلسىيە گرادۇستىن 80 سېلسىيە گرادۇسقىچە بولغان كەڭ تېمپېراتۇرا دائىرىسىدە يۇقىرى ئاكتىپلىقنى نامايان قىلغان بولسىمۇ، ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىققا يېقىنلاشقان (%69-98). ئۇنىڭ ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىقى 70 سېلسىيە گرادۇستا كۆزىتىلدى (رەسىم 2a). بۇ تېمپېراتۇرا دائىرىسىدىن سىرتتا، ئېنزىم ئاكتىپلىقى تەخمىنەن 70 سېلسىيە گرادۇستا تۆۋەنلىگەن. بۇ نەتىجىلەر ئېنزىمنىڭ يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا ئاكتىپ ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، چۈنكى يۇقىرى تېمپېراتۇرا رېئاكسىيەنىڭ كىنېتىك ئېنېرگىيىسىنى ئاشۇرىدۇ.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىكى رېئاكسىيە تېمپېراتۇرىسى (a) ۋە pH (b) نىڭ لاككازا پائالىيىتىگە تەسىرى. ئېنزىمنى قوشۇش ۋە رېئاكسىيەنى باشلاشتىن بۇرۇن ئارىلاشمىنى ھەر خىل تېمپېراتۇرىدا 5 مىنۇت ئالدىن ئىنكۇباتسىيە قىلىش ئارقىلىق 20 سېلسىيە گرادۇستىن 90 سېلسىيە گرادۇسقىچە بولغان تېمپېراتۇرىغا ئېرىشىلدى. pH نىڭ لاككازا پائالىيىتىگە بولغان تەسىرى ABTS نى سۇبسترات سۈپىتىدە ئىشلىتىپ، 0.1 M سىترات-فوسفات بۇفېرى بار ئېرىتمىلەردە pH قىممىتى 2.5 دىن 7.0 گىچە بولغان ئارىلىقتا باھالاندى.
ئېزىكې قاتارلىقلارنىڭ قارىشىچە^ئال.33، *Trametes polyzona* WRF03 لاككازنىڭ ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرىسى 55 سېلسىيە گرادۇس بولۇپ، بۇ *Ganoderma lucidum* نىڭكى بىلەن ئوخشاش.^laccase36ۋە *Trametes polyzona* KU-RNW02737 ئۈچۈن ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا (50 °C) غا ئوخشايدۇ.^لاككاز . ^{بالدرىئان38}باشقا لىگنىن پارچىلىغۇچى ئېنزىم سىستېمىلىرىغا ئوخشاش، لاككازا ئۈچۈن ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا دائىرىسى 50 سېلسىيە گرادۇستىن 70 سېلسىيە گرادۇسقىچە ئىكەنلىكىنى ئەسكەرتىدۇ.
نەتىجىلەر شۇنى كۆرسەتتىكى، بۇ ئېنزىم pH قىممىتى 3.0 بولغاندا ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىقنى نامايان قىلغان بولۇپ، pH قىممىتى 3.5 بولغاندا %94 كە يەتكەن. قانداقلا بولمىسۇن، ئۇ 2.5 دىن 7.0 گىچە بولغان كەڭ دائىرىلىك pH دائىرىسىدە ئاكتىپلىقىنى ساقلاپ قالغان (2b-رەسىم). ئۇنىڭدىن باشقا، ئۇ نېيترال ياكى ئىشقارلىق شارائىتقا سېلىشتۇرغاندا كىسلاتالىق شارائىتتا يۇقىرى ئاكتىپلىقنى نامايان قىلغان. ئۇنىڭ ئاكتىپلىقى 2.5 دىن 4.5 گىچە بولغان pH دائىرىسىدە كەم دېگەندە %77 بولغان، ئەمما pH قىممىتى 7.0 بولغاندا پەقەت تەخمىنەن %38 كە يەتكەن. *Trametes polyzona* WRF03 دىن ئېلىنغان لاككازنىڭ ئەڭ ياخشى pH قىممىتى 4.533 بولۇپ، بۇ *Trametes polyzona* KU-RNW02737، *Trichoderma harzanium* 39، *Pleurotus* sp. 40 ۋە *Trametes hirsuta* 41 دىن ئېلىنغان لاككازلارنىڭ pH قىممىتى بىلەن ئوخشاش. قانداقلا بولمىسۇن، Chairin قاتارلىقلارنىڭ تەتقىقاتىغا ئاساسلانغاندا.⁴²، *Polymorpha f. sp.* WR710-1 دىن ئېلىنغان لاككازانىڭ ئەڭ ياخشى pH قىممىتى 2.2، *Polymorpha f. sp.* IBL-04 دىن ئېلىنغان لاككازانىڭ ئەڭ ياخشى pH قىممىتى 5.043. گىدروكسىد ئانيونلىرىنىڭ (لاككازا چەكلىگۈچىسى) T2/T3 لاككازانىڭ مىس ئاتوملىرىغا باغلىنىشى نېيترال ياكى ئىشقارلىق pH شارائىتىدا لاككازا پائالىيىتىنىڭ تۆۋەنلىشىنىڭ سەۋەبى بولۇشى مۇمكىن. بۇ T1 مەركىزىدىن T2/T3 مەركىزىگە ئىچكى ئېلېكترون يۆتكىلىشىنى بۇزۇپ، شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ...^{чеклиди}ئېنزىم پائالىيىتى 23،44
ئېنزىمنى ھەر خىل تېمپېراتۇرىدا ئىنكۇباتسىيە قىلىش ئارقىلىق، ئىنكۇباتسىيە ۋاقتى ۋە تېمپېراتۇرا ئېنزىمنىڭ مۇقىملىقىغا تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقى بايقالدى. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، *Trametes polyzona* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككاز 40℃ ۋە 50℃ تېمپېراتۇرىدا يۇقىرى تۇراقلىققا ئىگە بولۇپ، 120 مىنۇتتىن كېيىن دەسلەپكى ئاكتىپلىقىنىڭ %68.33 ۋە %59.61 نى ساقلاپ قالغان (3a-رەسىم). ئەكسىچە، ئوخشاش شارائىتتا (40℃ ۋە 50℃، 120 مىنۇت)، *Trametes polyzona* WRF03 دىن ئېلىنغان لاككاز ئايرىم-ئايرىم ھالدا %64.38 ۋە %42.92 نى ساقلاپ قالغان.³³ئەكسىچە، ئىنكۇباتسىيە ۋاقتى ۋە تېمپېراتۇرىنىڭ ئېشىشى *Trametes polyzona* NRC 620 لاككازىنىڭ مۇقىملىقىنى تۆۋەنلىتىۋەتكەن؛ 60℃ ۋە 70℃ تېمپېراتۇرىدا 60 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلغاندىن كېيىن، ئۇنىڭ ئاكتىپلىقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %39.24 ۋە %1.72 كە تۆۋەنلىگەن (3a-رەسىم). تەجرىبە نەتىجىلىرىگە ماس ھالدا، *Trametes polyzona* WRF03 دىن ئېلىنغان لاككازى پۈتۈن ئىسسىقلىق بىر تەرەپ قىلىش جەريانىدا 40 ۋە 50℃ تېمپېراتۇرىدا يۇقىرى مۇقىملىقنى كۆرسەتكەن.³³شۇنىڭغا ئوخشاش، لۇئېڭجاروئېنكىت قاتارلىقلار^ئال.37ۋە چايرىن قاتارلىقلار^ئال.42Trametes polyzona KURNW027 ۋە Trametes polyzona WR710-1 دىن ئېلىنغان لاككازلارنىڭ 50 سېلسىيە گرادۇستا 1 سائەت مۇقىملىقىنى دوكلات قىلدى. ھەر خىل بىئوتېخنىكا ساھەلىرىدە قوللىنىلىدىغان پايدىلىق بىئو كاتالىزاتور بولۇش سۈپىتى بىلەن، لاككاز كەڭ تېمپېراتۇرا دائىرىسىدە ياخشى مۇقىملىق ۋە ئىقتىدارغا ئىگە بولۇشى كېرەك.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككازنىڭ تېرموستاتىك مۇقىملىقى (a) ۋە pH مۇقىملىقى (b). تېرموستاتىك مۇقىملىقى ئېنزىم ئېرىتمىسىنى 0.05 M ناترىي فوسفات بۇفېر (pH 7.0) دا 40، 50، 60 ۋە 70 سېلسىيە گرادۇستا ئايرىم-ئايرىم ھالدا 2 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىش ئارقىلىق باھالانغان. pH مۇقىملىقى ئېنزىم ئېرىتمىسىنى 0.1 M سىترات بۇفېر ۋە Tris بۇفېر (pH 3، 4، 6 ۋە 7) دا 40 سېلسىيە گرادۇستا 2 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىش ئارقىلىق باھالانغان. ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىنكى قالدۇق ئاكتىپلىق ABTS نى ئاساس قىلىپ ھېسابلانغان.
ئېنزىمنى ئىشلىتىش ۋە ساقلاشنىڭ ئەڭ ياخشى شارائىتىنى بېكىتىش ئۈچۈن، بىز pH نىڭ لاككازا مۇقىملىقىغا بولغان تەسىرىنى تەكشۈردۇق. ھەر خىل pH قىممەتلىرىگە دۇچ كېلىش ئاقسىل قۇرۇلمىسىنىڭ مۇقىملىقىغا زور دەرىجىدە تەسىر كۆرسىتىپ، ئېنزىم مولېكۇلاسىنىڭ مۇقىملىقى ۋە پائالىيىتىگە تەسىر كۆرسەتتى. نەتىجىلەر شۇنى كۆرسەتتىكى، ئېنزىم كىسلاتالىق شارائىتتا مۇقىم ئەمەس، يۇقىرى pH قىممىتىدە (نېيترال ۋە ئىشقارلىق رايونلار) تېخىمۇ ياخشى مۇقىملىقنى نامايان قىلدى. pH قىممىتى 7.0، 6.0، 4.0 ۋە 3.0 بولغاندا، 120 مىنۇتتىن كېيىن ئېنزىمنىڭ ساقلىنىش نىسبىتى تەخمىنەن %100، %62.54، %52.39 ۋە %11.14 بولدى (3b-رەسىم). *Strombus multisus* WRF03 لاككازا نېيترال pH قىممىتىدە (5.5–6.5) يۇقىرى مۇقىملىقنى، كىسلاتالىق pH قىممىتىدە (4.0 دىن تۆۋەن) تۆۋەن مۇقىملىقنى كۆرسەتتى. pH قىممىتى 5.5، 6.0 ۋە 6.5 بولغاندا 120 مىنۇت ساقلانغاندىن كېيىن، ئېنزىمنىڭ ساقلىنىش نىسبىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا تەخمىنەن %82، %100 ۋە %93 بولدى.³³خەيرىن قاتارلىقلار.⁴²Trametes polyzona WR710-1 دىن ئېلىنغان لاككازنىڭ pH قىممىتى 6.0 دىن 7.0 گىچە بولغان ئارىلىقتا مۇقىم ئىكەنلىكىنى، سەيىد قاتارلىقلارنىڭ بولسا ... دەپ كۆرسەتكەن.⁴⁵لاككازنىڭ نېيترال pH شارائىتىدا تېخىمۇ مۇقىم ئىكەنلىكىنى كۆرسەتتى. قانداقلا بولمىسۇن، Cerrena unicolor دىن ئېلىنغان لاككاز ئىشقارلىق شارائىتتا مۇقىملىقنى كۆرسەتتى (pH 9.0)⁴⁶تەتقىق قىلىنغان لاككازلار كەڭ دائىرىدىكى pH قىممىتى دائىرىسىدە يۇقىرى مۇقىملىقنى كۆرسەتتى. بۇ سانائەت قوللىنىشلىرى ئۈچۈن مۇھىم ئالاھىدىلىك بولۇشى مۇمكىن.
بەزى مېتال ئىئونلىرى ئېنزىم پائالىيىتىگە ھەم قوزغىتىش، ھەم چەكلەش تەسىرىگە ئىگە بولغاچقا، ئۇلارنىڭ ئېنزىم پائالىيىتىگە بولغان تەسىرىنى سانائەت قوللىنىشلىرىدا ئويلىشىش كېرەك. بۇ ئىنتايىن مۇھىم، چۈنكى مېتال ئىئونلىرى ھۈجەيرە سىرتىدىكى ئېنزىملارنىڭ مۇقىملىقى ۋە سىنتېزىغا تەسىر كۆرسىتىدىغان كۆپ ئۇچرايدىغان مۇھىت بۇلغىغۇچىلىرى.⁴⁷*Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككازغا كۆپ خىل مېتال ئىئونلىرىنىڭ تەسىرىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن، بىز ماس كېلىدىغان تەجرىبىلەرنى ئېلىپ باردۇق. 4-رەسىمدە كۆرسىتىلگەندەك، ئىشلىتىلگەن مېتالنىڭ تۈرىگە ئاساسەن، مېتال ئىئونلىرىنىڭ قويۇقلۇقىنى 2.5 mM دىن 10 mM غىچە ئاشۇرۇش ئېنزىمنىڭ ئىقتىدارىغا سەلبىي تەسىر كۆرسەتتى. مەسىلەن،^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺، ۋە^Cu²⁺ئېنزىم پائالىيىتىنى قوزغىتىپ ۋە ئاكتىپلاشتۇرالايدۇ، شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺، ۋە^K⁺ئېنزىم پائالىيىتىنى چەكلىشى مۇمكىن. 10 mM قويۇقلۇقتا، Cu²⁺ ۋە Mg²⁺ ئىئونلىرى *Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككازا پائالىيىتىنىڭ ئەڭ كۈچلۈك ئاكتىپلاشتۇرغۇچىسى بولۇپ، ئايرىم-ئايرىم ھالدا تەخمىنەن %34 ۋە %20 ئاكتىپلىنىش دەرىجىسىنى تەمىنلىگەن. قانداقلا بولمىسۇن، 10 mM قويۇقلۇقتا، Ca²⁺ ئىئونلىرى لاككازا پائالىيىتىنىڭ ئەڭ كۈچلۈك چەكلىگۈچىسى بولۇپ، ئېنزىم پائالىيىتىنى تەخمىنەن %60 تۆۋەنلىتىدۇ.
مېتال ئىئونلىرىنىڭ Pleurotus ostreatus NRC 620 لاككازنىڭ پائالىيىتىگە تەسىرى. لاككاز 2.5 mM ۋە 10 mM قويۇقلۇقتىكى ھەر خىل مېتال ئىئونلىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ناترىي فوسفات بۇفېرىدا (0.05 M، pH قىممىتى 7.0) 10 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى. ئاندىن رېئاكسىيە ئاساسىي ماددا (ABTS) قوشۇش ئارقىلىق باشلاندى، ئاندىن نىسپىي پائالىيەت ئۆلچەندى.
بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز Mg²⁺ ۋە Cu²⁺ نىڭ *Trametes polyzona* WRF03³ نىڭ پائالىيىتىنى كۈچەيتىدىغانلىقىنى بايقىغان باشقا ئاپتورلارنىڭ نەتىجىلىرى بىلەن ماس كېلىدۇ. Castaño قاتارلىقلار⁴⁸ *Xylaria* تۈرىدىكى لاككازنىڭ مەلۇم دەرىجىدە مىس ئىئونلىرى (Cu²⁺) تەرىپىدىن قوزغىتىلىدىغانلىقىنى بايقىغان. بۇنىڭدىن باشقا، Foroutanfar قاتارلىقلار⁴⁹ ۋە Si قاتارلىقلار⁵⁰ ئايرىم-ئايرىم ھالدا *Paraconiothyrium variabile* ۋە *Trametes pubescens* دىن ئېلىنغان لاككازلار ئۈستىدە ئوخشاش تەتقىقاتلارنى ئېلىپ بارغان. بۇ ئېنزىمنىڭ II تىپلىق مىس باغلىنىش ئورنى (T2) بەلگىلەنگەن قويۇقلۇقتا Cu²⁺ بىلەن تويۇنۇشى مۇمكىن، بۇ يۇقىرى Cu²⁺³⁹ قويۇقلۇقتا لاككاز پائالىيىتىنىڭ قوزغىلىشىنى چۈشەندۈرۈشى مۇمكىن. ئاق چىرىش زەمبۇرۇغى لاككازالىرى كۆپ خىل مىس ئاتوملىرىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ئوكسىدلىنىش فېرمېنتى بولغاچقا، مىس ئىئونلىرىنىڭ لاككازا پائالىيىتىگە بولغان تەسىرى كۆپ خىل بولۇپ، قوزغىتىش ۋە توسۇشتىن نېيترالغىچە بولىدۇ.⁵¹ بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا، جوۋ قاتارلىقلار^{. [52]}خەۋەر قىلدى^Cu²⁺تەيۋەن يەر ئاستى تېرمىتىنىڭ (Odontotermes formosanus) لاككازا پائالىيىتىنى چەكلىدى. قانداقلا بولمىسۇن، Cerena sp. HYB07 نىڭ لاككازالىرى^[53]ۋە Clitocybe maxima^[54]مىس ئىئونلىرىنىڭ تەسىرىگە ئۇچرىمىغان.
سۇبستراتنىڭ ئۆزگىچىلىكى ئۇنىڭ كىنېتىك پارامېتىرلىرى (Km ۋە Vmax) بىلەن ئىپادىلەنگەن؛ سۇبستراتنىڭ ئېنزىمغا باغلىنىشچانلىقى قانچە كۈچلۈك بولسا، Km قىممىتى شۇنچە تۆۋەن ۋە سۇبستراتنىڭ ئۆزگىچىلىكى شۇنچە يۇقىرى بولغان.^3،21،55*Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككازنىڭ كىنېتىكىلىق پارامېتىرلىرى (Km ۋە Vmax) GraphPad Prism 6.0 يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق Lineweaver-Burk گىرافىكىنى سىزىش ئارقىلىق بېكىتىلدى (5-رەسىم). ABTS نى ئاساس قىلىپ ئىشلەتكەندە، نەتىجە 1.99 mM ۋە 16217 μmol بولدى.^{مىنۇت⁻¹ L⁻¹,}ئايرىم-ئايرىم ھالدا. ئېلسايېد قاتارلىقلار.²¹ABTS ئوكسىدلىنىشىنىڭ Km قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 0.1 mM ۋە 0.064 mM ئىكەنلىكىنى دوكلات قىلدى، بۇ Lac A ۋە Lac B ئىزوئېنزىملىرىنىڭ ABTS غا بولغان يۇقىرى يېقىنلىقىنى كۆرسىتىدۇ. ئۇنىڭدىن باشقا، Vmax قىممىتى 0.182 μmol بولدى.^{مىنۇت⁻¹}ۋە 0.603 μmol^{مىنۇت⁻¹}، ئايرىم-ئايرىم ھالدا. ئېرىشكەن Km قىممىتى Trametes polyzona WRF03 نىڭكىدىن (8.66 mM) تۆۋەن ئىدى؛ ئۇنىڭدىن باشقا، ئۇلارنىڭ Vmax قىممىتى (1429 mmol min⁻¹)مۇ^{تۆۋەنرەك}ABTS نى ئاساسىي ماددا سۈپىتىدە ئىشلەتكەندە.33 شۇنىڭغا ئوخشاش، Lentinus squarrosulus MR13 ۋە Trametes sp. AH28-2 لاككازا قويۇقلۇقىنىڭ Km قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 0.0714 mM ۋە 0.025 mM، Vmax قىممىتى بولسا 0.0091 mM min−1 ۋە 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS غا نىسبەتەن) بولغان.^{، ئايرىم-ئايرىم ھالدا.56،57}
ABTS قويۇقلۇقىنىڭ *Pleurotus ostreatus* NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككازنىڭ پائالىيىتىگە بولغان تەسىرى تەكشۈرۈلدى، ھەمدە دەسلەپكى رېئاكسىيە سۈرئىتى بىلەن ABTS قويۇقلۇقىنىڭ ئۆز-ئارا قىممىتىنىڭ Lineweaver-Burk گىرافىكى سىزىلدى. لاككازنىڭ ھەر خىل قويۇقلۇقى (0.025–3.0 mM) بولغان ABTS نىڭ ئوكسىدلىنىش رېئاكسىيەسى pH قىممىتى 4.5 دە ئۆلچەنۈپ، كىنېتىكىلىق پارامېتىرلارنى (Vmax ۋە Km) بېكىتتى. Michaelis-Menten كىنېتىكىلىق تۇراقلىقلىرى Lineweaver-Burk گىرافىكى ئارقىلىق رېئاكسىيە سۈرئىتى بىلەن ئاساسىي قاتلام قويۇقلۇقىنىڭ ئۆز-ئارا قىممىتىنىڭ گىرافىكى ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ. كىنېتىكىلىق تۇراقلىقلار GraphPad Prism 6.01 يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق Lineweaver-Burk گىرافىكىدىن ھېسابلىنىدۇ.
پېكتىناز قاتارلىق ئەنئەنىۋى تازىلاش ئېنزىملىرى پېكتىك ماددىلارنى گىدرولىزلاپ، قويۇقلۇق ۋە لايلىقنى تۆۋەنلىتىدۇ. ئۇلار قۇرۇلمىلىق پولىساخارىدلارنى ئۈنۈملۈك پارچىلايدۇ ھەمدە كۆپىنچە باشقا ئېنزىملار، مەسىلەن سېللۇلازا ۋە گېمىسېللۇلازا بىلەن بىرلىكتە مەھسۇلات مىقدارى ۋە سۈزۈكلۈكنى ياخشىلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، پېكتىنازلار فېنول بىرىكمىلىرىنى نىشان قىلمايدۇ، چۈنكى بۇلار لايلىق ۋە ئوكسىدلىنىش ئارقىلىق قوڭۇرلىشىشنىڭ ئاساسلىق ئامىلى، بولۇپمۇ ئالما ۋە ئۈزۈم شەربىتى قاتارلىق مېۋە شەربەتلىرىدە.⁵⁸بۇنىڭغا سېلىشتۇرغاندا، لاككازا فېنول بىرىكمىلىرىنىڭ ئوكسىدلىنىشىنى كاتالىزاتورلۇق قىلىپ، ئۇلارنى پولىمېرلايدۇ، چوڭراق، ئېرىمەيدىغان مولېكۇلالارغا ئايلاندۇرىدۇ، بۇ مولېكۇلا چۆكمە ياكى سۈزۈش ئارقىلىق چىقىرىۋېتىلىدۇ. بۇ مېخانىزم پەقەت سۈزۈكلۈكنى ياخشىلاپلا قالماي، يەنە فېنول بىرىكمىلىرىنىڭ كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان ئوكسىدلىنىش قوڭۇرلىشىش ئېھتىماللىقىنى تۆۋەنلىتىش ئارقىلىق مېۋە شەربىتىنىڭ ساقلاش مۇددىتىنى ئۇزارتىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، لاككازا ئاساسلىق سۈزۈكلەشتۈرۈش جەريانلىرىنى يۇمشاق پىششىقلاش شارائىتىدا (pH 3.5–5.5، تېمپېراتۇرا 25–40 سېلسىيە گرادۇس) ئېلىپ بېرىشقا بولىدۇ، بۇ ئۇلارنىڭ ئوزۇقلۇق ياكى ئورگانولېپتىك خۇسۇسىيىتىگە تەسىر يەتكۈزمەستىن، نېپىز مېۋە شەربەتلىرىگە ماس كېلىدۇ.⁵⁹تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، پېكتىناز بىلەن داۋالاش 1-2 سائەت ئىچىدە مېۋە سۈيىنى سۈزۈكلەشتۈرەلەيدۇ، لاككازا بىلەن داۋالاش بولسا، ئادەتتە فېنول بىرىكمىلىرىنى پۈتۈنلەي ئازايتىش ئۈچۈن ئۇزۇنراق رېئاكسىيە ۋاقتىنى (3-6 سائەت) تەلەپ قىلىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ جەرياننى ئېنزىمنى ھەرىكەتسىزلەندۈرۈش ياكى لاككازانى مېخانىكىلىق سۈزۈكلەشتۈرۈش ئۇسۇللىرى بىلەن بىرلەشتۈرۈش ئارقىلىق ئەلالاشتۇرغىلى بولىدۇ.⁶⁰بۇ تەتقىقاتتا، خام ئېكىستراكتنىڭ ئېنزىم پروفىلىنى تەكشۈرۈشتە لاككازا ۋە α-ئامىلازنىڭ كۆرۈنەرلىك ئاكتىپلىقى بايقالغان، پېكتىنازا ۋە كسىلانازنىڭ ئاكتىپلىقى ئىنتايىن تۆۋەن بولغان، ھەمدە سېللۇلازانىڭ ئاكتىپلىقى بايقالمىغان. شۇڭلاشقا، لايلىق ۋە فېنول تەركىبىنىڭ تۆۋەنلىشى ئاساسلىقى لاككازانىڭ تەسىرىدىن بولغان، يېپىشقاقلىقنىڭ ئۆزگىرىشى قىسمەن ئامىلازانىڭ تەسىرىدىن بولۇشى مۇمكىن.
1-جەدۋەلدە يېڭى سىقىلغان ئالما شەربىتى ۋە لاككازا بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەۋرىشكىلەرنىڭ فىزىكىلىق-خىمىيىلىك پارامېتىرلىرى كۆرسىتىلدى. نەتىجىلەر شۇنى كۆرسەتتىكى، يېڭى سىقىلغان ئالما شەربىتىنىڭ مەھسۇلات مىقدارى (71.59%) لاككازا بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەۋرىشكىلەرگە (87.34%) قارىغاندا تۆۋەن. بۇ نەتىجىلەر پىلنىك ۋە ئاپېلسىننىڭ تەتقىقات نەتىجىلىرى بىلەن ماس كېلىدۇ.⁶¹، مېۋە پىششىقلاپ ئىشلەشتە ئېنزىملارنى ئىشلىتىشنىڭ مېۋە شەربىتى مىقدارىنى ئاشۇرۇش، سۈزۈشنى ياخشىلاش ۋە قويۇقلۇقى يۇقىرى سۈپەتلىك، سۈزۈك مېۋە شەربىتىگە ئېرىشىشكە بولىدىغانلىقىنى كۆرسەتتى. مېۋە شەربىتى مىقدارىنىڭ ئېشىشى ئاساسلىقى مېۋە شەربىتىدىكى ئېرىيدىغان شېكەر مىقدارىنىڭ ئېشىشىدىن كېلىپ چىقىدۇ. مېۋىلەرنىڭ ئېنزىملىق گىدرولىزلىنىشى جەريانىدا، مەھسۇلاتنىڭ ھۈجەيرە دىۋارىدىكى مېزوگلېيا ۋە پېكتىن بۇزغۇنچىلىققا ئۇچراپ، نېيترال شېكەر ۋە كىسلاتا قاتارلىق ئېرىيدىغان ماددىلارغا ئايلىنىدۇ.^62.ئېنزىم بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتىنىڭ pH قىممىتى كونترول گۇرۇپپىسىدىكىدىن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەن (P < 0.05)، ھەمدە ساقلاش جەريانىدا ئىككى گۇرۇپپىنىڭ pH قىممىتى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشقان (1-جەدۋەل). بۇ نەتىجىلەر مارك قاتارلىقلارنىڭ نەتىجىلىرى بىلەن ماس كېلىدۇ.⁶³، ئۇ ئىسسىقلىق بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغاندىن كېيىن ساقلانغاندىن كېيىن كېجۇ مېۋىسىنىڭ pH قىممىتىنىڭ تۆۋەنلىگەنلىكىنى بايقىغان. ئېنزىم بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغاندىن كېيىن پېكتىننىڭ پارچىلىنىشى ۋە گالاكتۇرون كىسلاتاسىنىڭ شەكىللىنىشى ساقلاش جەريانىدا pH قىممىتىنىڭ ئېشىشىغا سەۋەب بولۇشى مۇمكىن. ئېنزىم بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەۋرىشكىلەرنىڭ pH قىممىتى ساقلاش جەريانىدا 4.05 دىن 4.31 گىچە بولغان ئارىلىقتا، بىر تەرەپ قىلىنمىغان ئالما شەربىتىنىڭ pH قىممىتى بولسا 4.12 دىن 4.33 گىچە بولغان ئارىلىقتا بولغان.
بىر تەرەپ قىلىنمىغان ۋە لاككازا بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەۋرىشكىلەرنىڭ ئومۇمىي كىسلاتالىقى (TA) ساقلاش ۋاقتىنىڭ ئۇزىرىشىغا ئەگىشىپ تۆۋەنلەۋاتقانلىقى كۆرسىتىلدى (جەدۋەل 1). كىسلاتالىقنىڭ تۆۋەنلىشى ئورگانىك كىسلاتالارنىڭ كاربون سۇ بىرىكمىلىرىگە ئايلىنىشى ياكى ئېنزىملىق رېئاكسىيە، شۇنداقلا مېۋە سۈيى ساقلاش جەريانىدىكى ئوكسىدلىنىش بىلەن مۇناسىۋەتلىك.⁶⁴كونترول ئالما شەربىتى ۋە ئېنزىم بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەۋرىشكىلەرنىڭ ئومۇمىي كىسلاتالىقى باشقا شەربەتلەرگە قارىغاندا تۆۋەن (قۇلپىناي شەربىتى 0.9%، ئۆرۈك شەربىتى 2.2%، كۇمكۋات شەربىتى 1.0%، ئۆرۈك شەربىتى 2.4%، ئاپېلسىن شەربىتى 0.8%)، ئەمما باشقا شەربەتلەرگە ئوخشاش (مەسىلەن، نەشپۈت شەربىتى 0.3%).⁶²يېڭى سىقىلغان ئالما شەربىتىدىكى بۇ پەرقلەر ئۆسۈش شارائىتى، گېن ئامىللىرى، پىشىپ يېتىلىش دەرىجىسى ۋە پىششىقلاپ ئىشلەش ئۇسۇلى قاتارلىق ھەر خىل ئامىللار بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن.⁶⁵كونترول ۋە لاككازا بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتىنىڭ ئومۇمىي كىسلاتالىقىنىڭ تۆۋەنلىشى سىڭھ قاتارلىقلار كۆرسەتكەن نەتىجىلەر بىلەن ماس كېلىدۇ.⁶⁶جىن نۇئو ئالما شەربىتىنىڭ 74 كۈن ساقلانغاندىن كېيىن ئومۇمىي كىسلاتالىق دەرىجىسىنىڭ تۆۋەنلىشى توغرىسىدا. يەنە بىر تەرەپتىن، ئوشمىئانسكىي ۋە ۋوجدىلو⁶⁷ئەنئەنىۋى تازىلاش ئۇسۇللىرىنىڭ تەسىرىنى تەتقىق قىلغاندا، ئالما شەربىتىنىڭ كىسلاتالىقىدا ھېچقانداق مۇھىم ئۆزگىرىش بايقالمىدى.
1-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەن نەتىجىلەر، لاككاز بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتىنىڭ ئومۇمىي ئېرىيدىغان قاتتىق ماددىلار (TSS) قىممىتىنىڭ بىر تەرەپ قىلىنمىغان ئەۋرىشكەنىڭكىدىن يۇقىرى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بۇ نەتىجىلەر ئېلان قىلىنغان تەتقىقاتلار بىلەن ماس كېلىدۇ.⁶⁸بۇنىڭدىن باشقا، 1-جەدۋەلدە كۆرسىتىلىشىچە، كونترول ئالما شەربىتى گۇرۇپپىسىنىڭ TSS قىممىتى دەسلەپكى ۋاقىت نۇقتىسىدا 9.58 بولۇپ، ساقلاش مۇددىتى توشقاندا 11.05 كە يەتكەن. بۇ قىممەتلەر ھامىد قاتارلىقلار دوكلات قىلغان يېڭى ئالما شەربىتىنىڭ TSS قىممىتىدىن تۆۋەن.⁶⁹(ئايرىم-ئايرىم ھالدا 11.2 ۋە 11.80). لاككاز بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىلىرىنىڭ TSS قىممىتى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئېشىپ، 11.23 دىن باشلاپ 4 سېلسىيە گرادۇستا ئىككى ھەپتە ساقلانغاندىن كېيىن 12.93 كە يەتكەن (1-جەدۋەل). ساقلاش جەريانىدا TSS نىڭ ئوخشاش ئېشىشى سىترۇس مېۋىلىرى، لىمون ۋە تاتلىق ئاپېلسىنلاردىمۇ كۆزىتىلدى. ساقلاش جەريانىدا ئېرىيدىغان ئومۇمىي قاتتىق ماددىلارنىڭ (TSS) ئېشىشى پولىساخارىدلارنىڭ (كراخمال) مونوساخارىدلارغا (شېكەر) گىدرولىزلىنىشى، شەربەتنىڭ سۇسىزلىنىشى سەۋەبىدىن قويۇقلۇقىنىڭ ئېشىشى ۋە شەربەتتىكى پېكتىننىڭ ئېرىيدىغان قاتتىق ماددىلارغا پارچىلىنىشى سەۋەبىدىن بولۇشى مۇمكىن. ئېرىيدىغان ئومۇمىي قاتتىق ماددىلارنىڭ (TSS) ئېشىشى ئېرىيدىغان شېكەرنىڭ كۆپىيىشىدىن بولۇشى مۇمكىن، بۇ شېكەرلەر ئايرىم-ئايرىم ھالدا پېكتىن ياكى سېللۇلوزا تەرىپىدىن ئېرىيدىغان شېكەرگە ئايلىنىشى ياكى خامېد قاتارلىقلارنىڭ دوكلاتىغا ئاساسلانغاندا، كراخمالنىڭ شېكەرگە گىدرولىزلىنىشى ئارقىلىق شەكىللىنىشى مۇمكىن.^69.لاككازنىڭ ئالما شەربىتىنىڭ خۇسۇسىيىتىگە بولغان تەسىرىنى كۆز بىلەن كۆرگىلى بولىدۇ، چۈنكى لاككاز بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتى بىر تەرەپ قىلىنمىغان شەربەتكە قارىغاندا ياخشىراق ئېقىشچانلىقى ۋە تۆۋەن يېپىشقاقلىقىنى نامايان قىلىدۇ. بۇ كۆزىتىش 1-جەدۋەلدە خاتىرىلەنگەن؛ ئېنزىم بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئەۋرىشكىنىڭ يېپىشقاقلىقى 1.87 cP، كونترول ئەۋرىشكىسىنىڭ يېپىشقاقلىقى بولسا 2.95 cP بولغان. يېپىشقاقلىقنىڭ بۇ كۆرۈنەرلىك تۆۋەنلىشى پېكتىنغا ئوخشاش ماددىلارنىڭ سۇ ساقلاش ئىقتىدارىنىڭ يۇقىرى بولۇشى ۋە بىر گەۋدىلەشكەن تور قۇرۇلمىسىنىڭ شەكىللىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن.
بۇ تەتقىقاتتا، لاككازنىڭ ئالما شەربىتىنىڭ قوڭۇرلىشىش كۆرسەتكۈچىگە (BI) بولغان تەسىرى سپېكتروفوتومېتىر ئارقىلىق 420 نانومېتىردىكى سۈمۈرۈلۈشىنى ئۆلچەش ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى. نەتىجىلەر 1-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. ساقلاش جەريانىدا، بىر تەرەپ قىلىنغان ۋە بىر تەرەپ قىلىنمىغان گۇرۇپپىدىكى ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىلىرىنىڭ BI قىممىتى تەدرىجىي ئېشىش يۈزلىنىشىنى كۆرسەتتى. BI قوڭۇرلىشىش دەرىجىسىنى ئەكس ئەتتۈرىدۇ ۋە ... رولىنى ئوينايدۇ.^{مۇھىم بىر}ئېنزىملىق ۋە ئېنزىمسىز قوڭۇرلىشىش رېئاكسىيەسىنىڭ كۆرسەتكۈچى. ساقلاش جەريانىدا سۈمۈرۈلۈش كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشتى (P < 0.05). ساقلاش ئاخىرلاشقاندا،_A420كونترول گۇرۇپپىسى ۋە ئېنزىم بىلەن داۋالانغان گۇرۇپپىدىكى ئالما شەربىتى ئەۋرىشكىسىنىڭ قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %217 ۋە %121 ئاشتى (جەدۋەل 1). نەتىجىلەر شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، ئېنزىم بىلەن داۋالانغاندا قوڭۇرلىشىش دەرىجىسى تەخمىنەن %56 تۆۋەنلەيدۇ. بېزېررا قاتارلىقلارنىڭ نەتىجىسى.^[19]] بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز بىلەن ماس كېلىدۇ؛ ئۇلار ئالما شەربىتىنى سۈزۈكلەشتۈرۈش ئۈچۈن لاككاز-گلۇتارالدېھىد-كوكۇس تالاسىنى ئىشلىتىپ، ئۇنىڭ ئەسلى رەڭگىنى %61 تۆۋەنلىتىدۇ.
مېۋە شەربىتىدىكى پولىفېنوللار ئىنسان بەدىنىگە ئىجابىي ئوزۇقلۇق ۋە داۋالاش ئۈنۈمىگە ئىگە بولسىمۇ، ئۇلار ئاقسىللار بىلەن رېئاكسىيەلىشىپ، شەربەتنىڭ تۇتۇقلىشىشى، چۆكمىسى ياكى لايلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ، مەھسۇلاتنىڭ تەمى ۋە خۇشبۇيلۇقىنى ئۆزگەرتىپ، ساقلاش مۇددىتىنى قىسقارتىدۇ.⁷¹بۇ تەتقىقاتنىڭ مەقسىتى Pleurotus ostreatus NRC 620 دىن ئېلىنغان لاككاز ئارقىلىق ئالما شەربىتىدىكى فېنول بىرىكمە مىقدارىنى بىخەتەر ئازايتىش ئىدى. 1-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەن نەتىجىلەردىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇكى، لاككاز بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتىدىكى ئومۇمىي فېنول بىرىكمە مىقدارى 4 سېلسىيە گرادۇستا ساقلاشتىن بۇرۇن كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىگەن. ئۇنىڭدىن باشقا، تەتقىق قىلىنغان ئىككى ئەۋرىشكىدە ساقلاش جەريانىدا ئومۇمىي فېنول بىرىكمە مىقدارىمۇ تۆۋەنلىگەن (1-جەدۋەل). ساندرى قاتارلىقلارنىڭ تەتقىقاتى.⁷²ئېنزىم بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتىنىڭ ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقى ۋە فېنول بىرىكمىسىنىڭ تەركىبىنى ساقلاپ قالالايدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. قانداقلا بولمىسۇن، Lettera قاتارلىقلارنىڭ تەتقىقات نەتىجىسى.⁷³ئاپېلسىن شەربىتىنى زەمبۇرۇغ لاككازى بىلەن داۋالاش ئۇنىڭدىكى فېنول بىرىكمىلىرىنىڭ مىقدارىنى %45 گىچە تۆۋەنلىتىشى مۇمكىنلىكىنى كۆرسەتتى.
فېنول بىرىكمىلىرىنىڭ ئەركىن رادىكاللارنى يوقىتىش، يەككە ئوكسىگېننى قايتۇرۇش ۋە سۈزۈش، ۋودورود ئاتومىنى يۆتكەش ۋە ئەركىن رادىكاللارغا ئېلېكترون بېرىش قاتارلىق خۇسۇسىيەتلەرگە ئىگە ئىكەنلىكى، بۇ ئۇلارنىڭ كۈچلۈك ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش كۈچىگە ئىگە ئىكەنلىكى ئىسپاتلاندى.⁷⁴شۇڭلاشقا، بۇ تەتقىقاتتا، 14 كۈن توڭلاتقۇدا ساقلانغان ئالما شەربىتىنىڭ ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىغا بولغان تەسىرىنى باھالاش ئۈچۈن DPPH ۋە FRAP ئاساسلىق ئۇسۇللار قوللىنىلدى (2-جەدۋەل). ھەر ئىككى ئۇسۇل ساقلاش جەريانىدا ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنىڭ ئاشقانلىقىنى كۆرسەتتى، بۇ ئەركىن فېنول بىرىكمىلىرىنىڭ كۆپىيىشى ياكى مايلارد رېئاكسىيە مەھسۇلاتلىرىنىڭ (MRP) شەكىللىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن، مايلارد رېئاكسىيە مەھسۇلاتلىرى ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنىڭ ئېشىشىنىڭ سەۋەبى بولۇشى مۇمكىن.⁷⁵ئېنزىمسىز قوڭۇرلىشىش رېئاكسىيەلىرى (ئاسكوربىن كىسلاتا پارچىلىنىشى، مايلارد رېئاكسىيەسى ۋە شېكەرنىڭ كىسلاتالىق كاتالىزاتورلۇق پارچىلىنىشى قاتارلىقلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ) قوڭۇر پىگمېنتلارنى (مېلانوئىدىنلارنى) ھاسىل قىلىدۇ. ئارىلىق ئاسكوربىن كىسلاتا پارچىلىنىش مەھسۇلاتلىرى ۋە شېكەر پارچىلىنىش مەھسۇلاتلىرى (مەسىلەن، كاربونىل بىرىكمىلىرى) مايلارد رېئاكسىيەسى ئارقىلىق ئامىنو كىسلاتالار بىلەن رېئاكسىيە قىلالايدۇ.⁷⁶مېۋە-چېۋىلەرنى ساقلاش جەريانىدا قوڭۇر رەڭگە كىرىش مەسىلىسى كەڭ كۆلەمدە تەتقىق قىلىنغان بولسىمۇ، بۇ رېئاكسىيەلەرگە بولغان چۈشەنچىمىز يەنىلا چەكلىك.⁷⁷FRAP ئۇسۇلى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، لاككاز بىلەن بىر تەرەپ قىلىنغان ئالما شەربىتى DPPH ئۇسۇلى ئارقىلىق ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەن كۆرسەتتى (2-جەدۋەل)، ھەمدە بارلىق ئەۋرىشكىلەرنىڭ ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقى ساقلاش ۋاقتىنىڭ ئۇزىرىشىغا ئەگىشىپ كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشتى. بۇ تەتقىقاتتا ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنى بېكىتىشنىڭ ئىككى خىل ئۇسۇلى قوللىنىلدى، چۈنكى ئۇلارنىڭ پىرىنسىپلىرى ئوخشىمايدۇ. DPPH ئۇسۇلى ئەركىن رادىكاللارنى نېيتراللاشتۇرۇش ئىقتىدارىنى ئۆلچەيدۇ، FRAP ئۇسۇلى بولسا تۆمۈر ئىئونلىرىنى ئازايتىش ئىقتىدارىنى ئۆلچەيدۇ. شۇڭا، تەتقىق قىلىنغان ئەۋرىشكىلەرنىڭ ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنى تېخىمۇ ياخشى چۈشىنىش ئۈچۈن، ئوكسىدلىنىشقا قارشى تۇرۇش ئاكتىپلىقىنى بېكىتىشتە كۆپ خىل ئۇسۇللارنى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.⁷⁸
بۇ تەتقىقاتنىڭ مۇھىم بايقاشلىرىنىڭ بىرى شۇكى، *Pleurotus ostreatus* لاككاز NRC 620 70 سېلسىيە گرادۇس ۋە pH قىممىتى 3.0 بولغاندا ئەڭ ياخشى پائالىيەت كۆرسىتىدۇ. *Trametes versicolor* ۋە *Ganoderma lucidum* لاككازلىرىغا ئوخشاش مېۋە سۈيىنى تازىلاشتا كۆپ ئىشلىتىلىدىغان باشقا زەمبۇرۇغ لاككازلىرى بىلەن سېلىشتۇرغاندا، *P. ostreatus* NRC 620 يۇقىرى تېمپېراتۇرا مۇقىملىقى ۋە تېخىمۇ كىسلاتالىق pH قىممىتىنى كۆرسىتىدۇ. *Trametes versicolor* ۋە *Ganoderma lucidum* دىن ئېلىنغان لاككازلار ئادەتتە 50-60 سېلسىيە گرادۇس ئارىلىقىدا ۋە pH قىممىتى 3.5 بىلەن 5.0 ئارىلىقىدا ئەڭ ياخشى پائالىيەت كۆرسىتىدۇ. بۇ پەرق مېۋە سۈيىنى تازىلاش ئۈنۈمىنى ئاشۇرۇشقا تۆھپە قوشۇشى مۇمكىن، بولۇپمۇ تۆۋەن pH قىممىتىدىكى مۇقىملىق مۇھىم بولغان كىسلاتالىق مېۋە سۈيى ئۈچۈن. *P. نىڭ ئۆزگىچە ئالاھىدىلىكى. باشقا تەتقىق قىلىنغان زەمبۇرۇغ لاككازلىرىغا سېلىشتۇرغاندا، *Pleurotus ostreatus* NRC 620 تېخىمۇ قىيىن شارائىتلاردا ئۈنۈملۈك خىزمەت قىلىش ئىقتىدارىنى نامايان قىلىدۇ. ئۇنىڭ ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىق تېمپېراتۇرىسى سانائەت قوللىنىشلىرىدا، مەسىلەن تېز رېئاكسىيە سۈرئىتى ۋە مىكروبلارنىڭ بۇلغىنىشىنىڭ تۆۋەنلىشى قاتارلىق ئەۋزەللىكلەرنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. نۇرغۇن مېۋە شەربەتلىرىنىڭ كىسلاتالىق تەبىئىتىگە ماس كېلىدىغان تۆۋەن pH قىممىتى، مېۋە شەربىتىنى تازىلاش جەريانلىرىدا پايدىلىق بولۇشى مۇمكىن. بۇ نەتىجىلەر كەڭ كۆلەمدە قوللىنىش ئۈچۈن تېخىمۇ كۆپ ئىزدىنىش ئېلىپ بېرىشنى ئاساس قىلىدۇ، بۇ *Pleurotus ostreatus* NRC 620 نى ئەنئەنىۋى زەمبۇرۇغ لاككازى مەنبەلىرىنىڭ ئورنىنى ئالىدىغان ئۈنۈملۈك ئورۇنباسار قىلىدۇ. ئىلگىرىكى تەتقىقاتلار بىلەن سېلىشتۇرغاندا، بىز ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرىنىڭ 60 سېلسىيە گرادۇس، ئەڭ ياخشى pH قىممىتىنىڭ 3.0 ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق. 60 سېلسىيە گرادۇستا 80 مىنۇت رېئاكسىيە قىلغاندىن كېيىن، *Ganoderma lucidum* لاككازى ساقلىنىپ قالدى.⁴⁶ئۇنىڭ پائالىيىتىنىڭ %.79 كۇرنىئاۋاتى ۋە نىكېلنىڭ قارىشىچە⁸⁰، *Ganoderma lucidum* ئېنزىملىرى 25 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرىدا ۋە pH قىممىتى 5.0 دىن 8.0 گىچە بولغان ئارىلىقتا ئەلا ياكى ئوتتۇراھال تۇراقلىقلىقنى، pH قىممىتى 6.0 ۋە تېمپېراتۇرا 10 دىن 30 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئارىلىقتا تۇراقلىقلىقنى نامايان قىلىدۇ. بۇ تەتقىقاتتا، بىز *Pleurotus ostreatus* نىڭ ئېنزىم پائالىيىتى ئۈچۈن ئەڭ ياخشى pH قىممىتى ۋە تېمپېراتۇرىسىنىڭ ئايرىم-ئايرىم ھالدا 3.0 ۋە 70 سېلسىيە گرادۇس ئىكەنلىكىنى بايقىدۇق. ئىككى سائەت 40 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرىدا ئىنكۇباتسىيە قىلغاندىن كېيىن، ئېنزىم پائالىيىتىنىڭ ئايرىم-ئايرىم ھالدا %68.33 ۋە %59.61 نى ساقلاپ قالغان. ئۇنىڭدىن باشقا، Pleurotus ostreatus NRC 620 لاككاز 50 سېلسىيە گرادۇسلۇق تېمپېراتۇرىدا يۇقىرى ئاكتىپلىقنى نامايان قىلىپ، ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىققا (%69–98) يەتكەن، ئەڭ يۇقىرى ئاكتىپلىق 70 سېلسىيە گرادۇستا كۆزىتىلگەن.
خۇلاسە قىلىپ ئېيتقاندا، ستاتىك شارائىتتا قولغا كەلتۈرۈلگەن ئۇسترىتسە موگۇسى لاككاز NRC620 ھەر خىل pH قىممىتى ۋە تېمپېراتۇرا شارائىتىدا ئەڭ ياخشى پائالىيەت ۋە مۇقىملىقنى نامايان قىلىپ، باشقا ئېنزىم مەنبەلىرىگە سېلىشتۇرغاندا ئۈستۈن مۇقىملىقنى نامايان قىلدى. 10 mM MgSO₄ ۋە CuSO₄ قوشۇش ئېنزىم پائالىيىتىنى تەخمىنەن %21 ۋە %35 ئاشۇردى. ئالما شەربىتىگە پىششىقلاپ ئىشلەنگەندە، ئېنزىم pH قىممىتى ۋە قويۇقلۇقىنى تۆۋەنلىتىدۇ، ساقلاش جەريانىدا فېنول مىقدارى پەقەت ئازراقلا تۆۋەنلىدى.
بۇ نەتىجىلەر لاككازنىڭ يېمەكلىك سانائىتىدە، بولۇپمۇ ئىچىملىكلەرنى تازىلاشتا ئىشلىتىشتىكى يوشۇرۇن كۈچىنى جەزملەشتۈردى. لاككاز فېنول بىرىكمىلىرىنى پارچىلاش ئارقىلىق پەقەت لايلىقنى ئازايتىپ، سۈزۈكلۈكنى ياخشىلاپلا قالماي، يەنە يۇمشاق ئىشلىتىش شارائىتىدا مېۋە سۈيىنىڭ سۈپىتىنى ساقلايدۇ. جېلاتىن، بېنتونىت ۋە كرېمنىي گېلى قاتارلىق ئەنئەنىۋى تازىلاش دورىلىرىدىن پەرقلىق ھالدا، لاككاز ئىسراپچىلىق پەيدا قىلمايدۇ ياكى ئىچىملىكلەردىن خۇش پۇراقنى چىقىرىۋەتمەيدۇ، بۇ ئۇنى تېخىمۇ مۇھىت ئاسرايدىغان ۋە ئىمكانقەدەر ئۇزاققىچە ئىشلىتىشكە بولىدىغان تاللاشقا ئايلاندۇرىدۇ. ئۇنىڭدىن باشقا، باشقا ئېنزىملار ۋە سۈزۈش ئۇسۇللىرىغا سېلىشتۇرغاندا، لاككاز مەھسۇلات سۈپىتىگە تەسىر كۆرسەتمەي، نىشانلىق ۋە ئۈنۈملۈك ھەل قىلىش چارىسى بىلەن تەمىنلەيدۇ.
Kyomuhimbo, HD ۋە Brink, HG. مىس تەركىبلىك لاككازلارنىڭ قوللىنىلىشى ۋە ھەرىكەتسىزلەندۈرۈش ئىستراتېگىيىسى؛ بىر ئوبزور. Heliyon 9, e13156 (2023).